ELISA实验因灵敏度高，特异性强在生物科研上得到了广泛的认可，但对初学者而言，如不注意实验操作过程中的各个环节，可能会对最终的实验结果产生比较大的影响，比如实验出现白板，显色弱灵敏度低，花板无梯度背景高等现象。下面对以上实验现象进行一一解析。1.白板现象在完成所有实验步骤进行底物TMB溶液显色后，酶标板中所有孔的颜色均为无色，即无信号呈现。出现该现象的可能原因：试剂已过保质期，不同批次稀释液交叉使用。错加漏加检测A，检测B或者底物溶液TMB。洗板或者加样过程中，酶标记物被污...

吉姆萨染液由天青，伊红组成。染色原理和结果与瑞特染色法基本相同。但本法对细胞核和寄生虫着色较好，结构显示更清晰，而胞质和中性颗粒则着色较差。基本方案实验材料原位杂交玻片试剂、试剂盒吉姆萨染色液磷酸钠缓冲液乙醇二甲苯仪器、耗材染色盘培养箱滤纸实验步骤1.将显影的玻片置于玻片架上，浸入盛有水的染色盘中。（1）1个盘：pH6.810mmol/l磷酸钠缓冲液，所配的25倍稀释的吉姆萨染液。（2）3个盘：水。（3）脱水系列溶液：①3个盘：分别盛50%、70%和95%乙醇。②2个盘：盛有...

蛋白提取组织样本总蛋白提取（小鼠肝组织）1、颈椎脱臼处死小鼠，75%乙醇擦拭皮肤，剪开腹腔，剪切肝脏组织。2、平皿中放入6ml预冷0.9%NaCL。3、称取0.6g左右肝组织，在平皿中剪碎组织，并转移到匀浆器。4、预冷裂解液中添加PMSF（20ug/2ml）。5、取2ml预冷裂解缓冲液，迅速加入匀浆器，冰浴条件下充分研磨。6、组织研磨液转移至1.5ml离心管。7、4℃，15000rpm，离心10min。8、取上清组织蛋白粗提取液至新的1.5ml离心管。9、进行蛋白定量，-80...

1.对于贴壁细胞或细胞涂片PBS洗涤一次。2.如果细胞贴得不牢，可以干燥样品使细胞贴得更牢。3.用4%多聚甲醛固定细胞15分钟，用PBS洗涤一次。4.将切片移入湿盒中加入新鲜配制的3%双氧水,以去除内源性过氧化物酶封闭液，室温孵育10分钟，PBS充分淋洗；5.滴加正常山羊血清封闭液，室温30分钟，甩去多余液体；6.滴加一抗工作液，37℃孵育2h（或4℃过夜），然后PBS充分淋洗；7.滴加兔/鼠二抗工作液，室温孵育1h，PBS充分淋洗；8.DAB显色5-10分钟，在显微镜下掌握...

一般使用辣根过氧化物酶HRP-ECL发光法或碱性磷酸酶AP-NBT/BICP显色法。1．HRP-ECL发光法：将A、B发光液按比例稀释混合。膜用去离子水稍加漂洗，滤纸贴角吸干，反贴法覆于A、B混合液滴上，熄灯至可见淡绿色荧光条带（5min左右）后滤纸贴角吸干，置于保鲜膜内固定于片盒中，迅速盖上胶片，关闭胶盒，根据所见荧光强度曝光。取出胶片立即*浸入显影液中1～2min，清水漂洗一下后放在定影液中至底片*定影，清水冲净晾干，标定Marker，进行分析与扫描。2．AP-NBT/B...

目的：研究杨梅苷对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的保护作用及其机制。方法：60只SD大鼠随机分为6组:正常对照组、模型组、阳性给药组(维拉帕米100μg/L)和杨梅苷低中高剂量组(2.5,5,10mg/L),每组10只。釆用Langendorff离体心脏灌流技术,停灌30min,再灌45min,造成心肌缺血再灌注损伤模型。记录杨梅苷对心脏血流动力学指标的影响,测定冠脉流出液中心肌三酶LDH、CK、AST的水平,心肌组织中抗氧化酶SOD、CAT的活性及脂质过氧化物MDA的含量。HE...

目的：探讨和比较不同干预方案下辛伐他汀对去卵巢大鼠骨丢失和骨质量下降的干预效果。方法：3月龄雌性SD大鼠32只,随机分为4组,每组8只:假手术(A)组、卵巢切除(B)组、卵巢切除加辛伐他汀前半程干预组(C)和后半程干预组(D)。除A组接受假手术外,其余各组大鼠行双侧卵巢切除术,C组于术后给予辛伐他汀(5mg/kg/d)干预10周后停药,D组于术后10周开始接受辛伐他汀干预。术后20周处死所有大鼠,采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清I型前胶原氨基端前肽(PINP)、I...