微孔滤膜培养小室及双室联合培养系统（Transwell实验）：应用微孔滤膜培养小室，进行胶质瘤细胞与内皮细胞的联合培养，可以更接近体内环境，模拟瘤细胞对血管内皮细胞的作用，滤膜上8μm的微孔可允许内皮细胞穿过到达膜的下面，这些穿越迁移的内皮细胞可粘附于膜的下面，通过计数滤膜下面的细胞可基本反映细胞的迁移情况。Transwell的基本原理是将Transwell小室放入培养板中，小室内称为上室，培养板内称为下室，上室内添加上层培养液，下室内添加下层培养液，上下层培养液以膜相隔。将...

一、实验原理各种细胞操作，包括传代、冻存和原代组织的分离，均能导致细胞死亡。为了确定群体细胞中的存活细胞数，可采用台盼蓝染料排斥实验（Phillips1973)。正常的健康细胞能排斥染料，但细胞膜完整性丧失后台盼蓝可弥散入细胞内。染料排斥实验是一种粗糙的估计细胞活力的方法，无法区别10%~20%的活力差异。除此之外，排斥染料的细胞有可能不贴壁或不能较长时问生存或繁殖。二、实验方法1)胰蛋白酶处理细胞，无菌状态下取0.5ml细胞用PBS稀释至每毫升2X105~4X105。2)向...

一、细胞转染细胞转染是指将外源分子如DNA，RNA等导入真核细胞的技术。常规转染技术可分为瞬时转染和稳定转染两大类。本实验室主要是质粒转染、miRcroRNA转染、慢病毒转染、药物转染、多肽转染等。二、miRcroRNA转染（一）实验材料及试剂六孔板、CO2培养箱、EP管、酒精灯等；无血清培养基、MEM-α或DMEM、RNA、lipofectamine2000、MSC细胞等。（二）实验内容1当六孔板中MSC细胞密度达90％时，准备转染，将无血清培养基、MEM-α或DMEM取出...

流式细胞术检测细胞周期1。实验原理用流式细胞仪检测细胞周期，通常用碘化丙啶（propidiumiodide，PI）染细胞核。PI在一定波长的光下发出荧光，其强度与DNA含量成正比。通过流式细胞仪分析各时期的细胞百分数，可检测细胞的增殖、凋亡。2。流式细胞仪检测A549细胞周期步骤收集对数生长期细胞，计数，以(1~5)×105/孔接种于6孔板，置37℃，5％CO2条件下培养过夜，使细胞贴壁。次日更换培养液，各孔分别加入含有0、80、400、2000、10000mg/L不同浓度茶...

1、炎症灶内主要是巨噬细胞、淋巴细胞和浆细胞浸润。单核吞噬细胞的浸润对慢性炎症十分重要。单核细胞从血管游出后转化为巨噬细胞。巨噬细胞还可被激活。在炎症灶局部巨噬细胞的积聚有三方面的原因：①由于从炎症灶不断产生吸引单核细胞的趋化因子，如C5a、纤维蛋白多肽、阳离子蛋白质及胶原和纤维粘连蛋白的分解产物等。因此，从血液循环中渗出的单核细胞源源不断来到局部，这是局部巨噬细胞的主要来源。②游出的巨噬细胞在局部通过有丝分裂而增殖，但巨噬细胞局部增殖的起始动因还不清楚。③炎症灶内的巨噬细胞...

激光扫描共聚焦显微镜可测定的样品种类很多．包括生物材料、组织(切片)、细胞(亚细胞)结构等。样品中荧光的来源主要有如下几种：自发荧光(autofluorescence)、荧光染色、免疫荧光、荧光蛋白、诱发荧光(inducedfluorescence)及酶致荧光(enzymaticallyproducedfluorescence)等等。其中大部分荧光素的激发和发射波长均可在仪器自带软件的染料信息库中找到。1．观察步骤及仪器操作根据实验要求制备样品完毕后。即可进行观察。基本步骤如...

人非小细胞肺癌裸鼠原位种植转移模型的建立：（1）探讨肺癌远处转移和阻断其远处转移的研究；（2）模拟晚期非小细胞肺癌转移的自然发生过程；（3）在活体动物的完整器官内评估瘤细胞播散和肿瘤的生长。实验方法原理将表达GFP的质粒pRNAT-U6/Neo转染人肺腺癌细胞A549，G418筛选获得稳定表达GFP细胞，对比转染前后细胞的生长活性和成瘤性。将转染后细胞原位种植裸鼠预定标准处死。HE染色和免疫组化检测转移灶的位置和数目。利用KODAKIS2000MM系统检测肿瘤播散情况。实验材...