材料：6孔板marker笔直尺20微升枪头（灭菌）无血清培养基PBS准备：所有能灭菌的器械都要灭菌，直尺和marker笔在操作前紫外照射30min（超净台内）流程：1、先用marker笔在6孔板背后，用直尺比着，均匀地划横线，大约每隔0.5~1cm一道，横穿过孔。每孔至少穿过5条线。2、在空中加入约5X105个细胞，具体数量因细胞不同而不同，掌握为过夜能铺满。3、第二天用枪头比着直尺，尽量垂直于背后的横线划痕，枪头要垂直，不要倾斜。4、用PBS洗细胞3次，去除划下的细胞，加入...

初代培养或原代培养，是从供体获取组织后的培养。组织和细胞刚刚离体，生物性状尚未发生很大的变化，具有二倍体遗传性状，在供体来源充分、生物条件稳定的情况下（年龄、性别），在一定程度上能反映体内状态。实验方法原理消化培养法合成培养基胰蛋白酶消化培养法，能把组织块分散成细胞团或单个细胞，便于细胞从培养液中摄取营养和排出代谢产物，细胞能较快地长成单层。本法尤适用于培养大量组织，细胞产量高；但用于经常性小量培养工作稍显繁琐，无菌操作不良时且易污染。实验材料组织试剂、试剂盒Hanks培养液...

原理：脑实质内注射胶原酶，胶原酶破坏血管的基底层，导致渗漏血液流入周围组织。动物：雄性SD大鼠，年龄10-12周，体重300-350g。麻醉期间，大鼠体温维持在37度，体温维持直到从麻醉状态苏醒，恢复正常运动为止。建模：大鼠麻醉，固定立体定位仪上，在头皮上做1cm长的中线切口。用棉签除去覆盖在大鼠头皮上的软组织，确认颅骨上的Bregma点位置。右侧钻孔的位置：Bregma点前0.6mm，侧面2.9mm，微量注射器进入基底节，深度距颅骨平面5.5mm。以0.1ul/min速度注...

药品：6-OHDAHCl：16μg溶解在4μLACSF中。ACSF：0.15MNaCl,2.75mMKCl,1.2mMCaCl2,ａnd0.85mMMgCl2。动物：雄性Wistar大鼠，重量300-400g。建模：1.大鼠常规麻醉，然后固定在立体定位仪上。2.暴露大鼠颅骨，在右侧内侧前脑束（medialforebrainbundle,MFB）上方钻孔，孔的坐标:(AP),-1.9mm,(ML),-1.9mm,(DV),-7.2mm。3.0.5μL/min，注射4ul，为避免...

肢体缺血动物模型是进行缺血损伤机制、血管新生等研究的基础，成功制作一种效果确切、重复性强的肢体缺血模型是保证实验研究能够顺利进行的关键。当前缺血性疾病患者日渐增多，以糖尿病肢体动脉闭塞症（DAO）、闭塞性动脉硬化症（ASO）和血栓闭塞性脉管炎（TAO）为主的下肢缺血性疾病发病率逐年增加。国外资料显示，70岁以上老年人群中仅动脉硬化闭塞症患病率即可达15%~20%。而患病人群范围可覆盖至青壮年，其高发生率和广泛累及率已严重危害着人们的身心健康和生存质量，亟待探索其发生机制、预防...

药品：6-OHDAHCl：16μg溶解在4μLACSF中。ACSF：0.15MNaCl,2.75mMKCl,1.2mMCaCl2,ａnd0.85mMMgCl2。动物：雄性Wistar大鼠，重量300-400g。建模：1.大鼠常规麻醉，然后固定在立体定位仪上。2.暴露大鼠颅骨，在右侧内侧前脑束（medialforebrainbundle,MFB）上方钻孔，孔的坐标:(AP),-1.9mm,(ML),-1.9mm,(DV),-7.2mm。3.0.5μL/min，注射4ul，为避免...

1，什么是瞬时转染和稳定转染？瞬时转染：外源片段的表达时间短暂。这主要是因为外源导入的裸露的载体整合入基因组的几率非常低，所以以染色体外(episomal)形式存在，不能随细胞分裂而一同复制导致最后拷贝数被稀释导致的。而且考虑到细胞分裂会稀释质粒的量，所以起初转染的质粒拷贝数*。这就导致瞬时转染呈现一个高拷贝到低拷贝迅速降低的过程，且无法在这个系统上实现可诱导表达。稳定转染：是相对瞬时转染而言，进入细胞的质粒整合入细胞基因组中，并能随细胞分裂稳定传递下去。在这个系统中，质粒表...