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稳转株筛选实验

简要描述:稳转株筛选实验:稳定表达细胞株(稳转细胞株)指在细胞中持续稳定表达特定基因或干扰特定基因表达。稳转细胞株的目的基因质粒DNA整合到细胞染色体上,使细胞长期稳定表达该基因。

  • 更新时间:2021-11-12
  • 浏览次数:305

详细介绍

稳转株长用于基因研究方向,便于长期观察和检验基因对于细胞功能以及蛋白的相互作用。

一般转染实验方法:

用转染质粒或病毒侵染的方法将构建好的含靶基因的载体导入细胞,根据不同的基因载体中所含的抗性标志选用相应的试剂进行筛选混合阳性克隆。在阳性混合克隆的基础上,得到单细胞长出的阳性单克隆,继而得到稳定转染细胞株。

一般筛选方法:

1、转染质粒后,单克隆方法筛选稳定细胞系

对大多数细胞转染效率较低。对于基因过表达,如果转染效率达到40%,基因过表达尚可。但是对于基因干扰实验,对转染效率要求远远高于基因过表达,通常质粒转染无法满足。

另外,质粒游离于细胞质中,很快降解,无法满足较长时间的检测项目;质粒转染整合几率极低,稳定细胞株构建耗时耗力,且得率很低,往往需要挑取单克隆株。

2、病毒感染筛选稳定细胞株

病毒感染方法较质粒转染筛选单克隆方法更方便和高效,是目前主流的稳定细胞系筛选方法。用慢病毒制备稳转细胞株,由于其高效整合、高效转录、高效表达、宿主范围广,感染效率高,且与细胞染色体整合而不发生基因重排,是制备稳定细胞株的理想载体。

 

服务内容:1、稳定:15代以内细胞稳定表达。

           2、迅速:一般控制在1个月以内完成构建。

           3、经济:价格实惠。

           4、质量:对外源基因进行严格鉴定。

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