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过表达慢病毒构建及包装实验

简要描述:过表达慢病毒构建及包装实验:慢病毒(Lentivirus)载体是以 HIV-1 (人类免疫缺陷1型病毒)为基础发展起来的基因治疗载体。具有感染谱广泛、可以有效感染分裂期和静止期细胞、长期稳定表达外源基因等优点,因此成为导入外源基因的有力工具。现在慢病毒系统已经被广泛应用到各种细胞系的基因过表达、RNA干扰、microRNA研究以及活体动物实验中。

  • 更新时间:2021-11-12
  • 浏览次数:259

详细介绍

1 、过表达慢病毒构建及包装实验特点:

1.1 直接包装成为假病毒颗粒,对分裂和非分裂细胞均有感染作用,适合RNAi研究和体内实验中难于转染的细胞 (比如神经元细胞、干细胞或其它原代细胞)。

1.2 可以通过简单方式,在短时间内获得稳定表达特定基因的多种细胞株。

1.3 可用于基因敲除、基因**和转基因动物研究。

1.4 无需转染试剂,操作简便。

1.5 可以根据客户需要制备多种标记。

2、过表达慢病毒构建及包装实验原理:

慢病毒(Lentivirus)是逆转录病毒的一种。构建的siRNA / miRNA慢病毒载体,与化学合成的siRNA和基于瞬时表达载体构建的普通siRNA载体相比,一方面可以扩增替代瞬时表达载体使用,另一方面,Lentivirus-siRNA克隆经过慢病毒包装系统包装后,可用于感染依靠传统转染试剂难于转染的细胞系如原代细胞、悬浮细胞和处于非分裂状态的细胞,并且在感染后可以整合到受感染细胞的基因组,进行长时间的稳定表达。

3 、过表达慢病毒构建及包装流程:

3.1 含有目的基因的慢病毒表达载体的构建和质粒纯化提取。

注:客户也可以提供构建好的重组慢病毒表达载体。

3.2 慢病毒表达载体与包装系统共转染病毒包装细胞。

3.3 收集病毒液。

3.4 纯化和浓缩病毒。

3.5 分装、- 80 oC保存。

3.6 滴度测定及无菌检测。

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